小鼠狂犬病毒抗体(RVAb)Elisa试剂盒洗涤方法
小鼠狂犬病毒抗体(RVAb)Elisa试剂盒洗涤方法:
1.实验之前准备好所有的标准品(见备用试剂)。建议所有的标准和样本都做复孔。
2.首先把微孔板固定在支架上,分别设好相应的孔(空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔),然后在包被板上,标准品和代测样本孔准确加样50μl
3.加10 μL的*到代测样本孔中。(标准孔不加)
4.每孔加入酶标试剂50μl,混合,混合在这一步是很重要的。封板后置37℃温育1个小时。
5.在温育结束前15分钟内准备显色液。(见备用试剂)
6.用下面的一种方法洗板;
7.手洗:将微孔板中的混合物倒入合适的废物器皿中,然后每孔注满稀释好的洗涤液,再到掉,如此重复4次,然后倒置微孔板,将其拍到吸水纸上或者纸巾上,直到拍干。、
(注:洗板的时候要紧握微孔板的两侧,以确保所有的板条不脱落)
8.机洗:吸干所有的孔,然后用洗板机洗板5次,调整洗板机尽可能洗掉所有的液体,设置填充量在350微升/孔/清洗(范围:350-400微升),洗板后,倒置微孔板,将其拍到吸水纸上或者纸巾上,直到拍干。建议洗板机设置的浸泡时间为10秒,震动时间为5秒。
9.每孔依次加入显色剂A 50μl,显色剂B 50μl,封板后置20-25°C显色15分钟.
10.每孔加终止液50μl混合
11.在30分钟以内读酶标仪在450nm波长的O.D值