细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
公司细胞现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称
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规格
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型号
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小鼠肺成纤维细胞
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5×10?Cells/T25培养瓶
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GOY-01X0704
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冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验事项:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
2 ug pBiFC-CC155 pBiFC-CC155 低温运输,-20℃保存
30次 柱式腐殖酸 Column Humic Acid Erasol 4℃保存
2 ug pET-38b(+) pET-38b(+) 低温运输,-20℃保存
PH7.6盐缓冲液 250ml*20瓶
1瓶 BALB/3T3 clone A31细胞株 BALB/3T3 clone A31 低温运输和保存
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)颗粒 Violet Red Bile Agar 300ml/袋*10
1套 克必隆eTS cDNA文库构建试剂盒
250mL Nitrocellulose Stripping Buffer,10X(硝酸纤维素膜剥离缓冲液,10X) Nitrocellulose Stripping Buffer,10X 常温保存
20次 即用型蓝白T载体E型(无启动子,无MCS) Instant Blue-White Vector T,Type E -20℃保存
2 ug pMKO.1-puro hTERT shRNA pMKO.1-puro hTERT shRNA 低温运输,-20℃保存
麦芽浸粉 200g
1瓶 Yac-1细胞株 Yac-1 低温运输和保存
亚硫酸铋琼脂(BS) Bismuth Sulfite Agar 250g
500mg 崩溃 Driselase From Basidiomycetes sp -20℃保存
小鼠肺成纤维细胞PCR扩增检测试剂盒
DICER酶基因敲除试剂盒 5次
动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒 20次
增强型HRP-DAB底物显色试剂盒 10次
定量检测试剂盒
血液甘露醇含量比色法定量检测试剂盒 20次
体液牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次
CYTOCHROME C蛋白表达西方杂交分析试剂盒 5次
M. fortuitum RFLP基因分析试剂盒 20次
胰蛋白酶(0.25%)乙二胺四乙酸混合液100毫升
细胞培养悬液氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒 50次
动物糖蛋白酶解法完全糖基分解试剂盒 20次