培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)?;灰翰?检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
下列是产品的订购信息:
产品名称
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规格
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型号
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小鼠肾动脉平滑肌细胞
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5×10?Cells/T25培养瓶
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GOY-01X0917
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
TSN琼脂 英文名称:TSN Agar 产品规格:250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Pro-MCH
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Lysophosphatidic acid receptor 4
葡萄糖 英文名称: 产品规格:20支
78-5000 pg/mL 西尼罗河病毒(WNV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphoglycerate kinase 1
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Ovostatin homolog 2
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 4
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Prostaglandin G/H synthase 2
布鲁氏培养基 英文名称:Brucella Agar 产品规格:250g
布鲁氏培养基 英文名称:Brucella Agar 产品规格:250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Adenosine receptor A2a
0.625-40 ng/mL 人蛋合(Methionine synthase) ELISA试剂盒
15.6-1000 pg/mL 口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
1.56-100 U/L 人二氢还原(Dihydrofolate reductase)ELISA试剂盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Signal-induced proliferation-associated 1-like protein 1
7.8-500 pg/mL 3型脊髓灰质炎病毒(PV-3)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
156-10000 U/mL ELISA Kit for Human Complement factor H
HBI单增李斯特氏生化鉴定条(GB) 英文名称: 产品规格:5条/盒
15.6-1000 pg/mL 人补体成分5(C5)ELISA试剂盒
小鼠肾动脉平滑肌细胞仓鼠心肌肌钙蛋白I(TNNI3)试剂盒特价直销
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补体蛋白5(C5)试剂盒特价直销
马缺氧诱导因子α亚基(HIF3A)试剂盒特价直销
白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)试剂盒进口、组装
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大鼠8-异构前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)试剂盒进口、组装